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김치, 그것이 알고 싶다
유산균 보관 및 관리 방법
상상건 산지직송 농,수산 장터 (ip:) / 2020-01-15 / 0점 / 조회수 884 추천하기

▶ 단기 보관 방법


계대배양(subculturing)

- 신선한 배지에 주기적으로 균을 옮겨주는 전통적인 방법이며, 균주별로 배지 종류,

외부 환경에 따라 이식 주기가 다릅니다.

- 보존용 배지: 미생물의 대사율을 낮게 유지시킴으로써 이식 빈도를 줄이는 데는 최소 배지를

사용하는 것이 좋으며, 경우에 따라서는 복합 배지를 사용하여 특정한 생리적 특성을 유지하

기도 합니다.

- 보관: 상온에서 시험관대에 보존하며 건조의 위험을 최소화하기 위해 고무 띠가 있는 마개나

파라필름을 사용하여 시험관을 플라스틱 통에 넣어두어야 합니다. 대사 속도를 줄이기 위해

냉장 보관하면 3~5개월 정도 보존이 가능합니다.

- 계대배양 방식: 배지를 갈아주는 시간 간격은 실험에 의해 결정됩니다. 연속적으로 배지를

갈아주면서 균주가 순수 배양되는지 검사하고 형질이 변화되는지 간략한 특성 판별이 수행

되어야 합니다.

- 단점: 오염의 위험, 잘못된 표기의 가능성, 돌연변이주의 선별 가능성, 균주의 손실 가능성,

그리고 보관의 어려움 등이 있습니다.


광유침지법(mineral oil)

- 멸균된 광유(액체 파라핀 등)에 담그는 방법으로 과정이 간단하고 비용이 저렴합니다. 몇

달 내지 몇 년 동안 보관할 수 있으나, 오염을 방지하려면 광유를 170℃ 건조기(dry oven)에

서 약 1~2시간 가열 살균해야 합니다(고압 증기 멸균은 부적합).

- 사면배지에 배양한 후 멸균된 광유를 적어도 2cm 이상 넣고 냉장고에 바로 세워 보관합니다.


동결보존법(freezing)

- 세포를 동결해 대사 활동을 정지시킨 후 휴지 상태로 장기간 보존하는 방법입니다. 동결에

의해 형성된 빙정의 상태나 온도를 -20∼-80℃로 낮추어 보존하는 방법과, 액체질소

(-196℃) 또는 다른 종류의 기체(-150∼-170℃) 속에서 보존하는 방법이 있습니다.




▶ 장기 보관 방법


동결건조법(lyophilization)

- 미생물을 장기간 보관하는 가장 경제적이고 효과적인 방법 중의 하나입니다. 감압 상태에서

동결시킨 미생물 배양액으로부터 승화에 의해 물을 제거하는 방법이며, 생리적으로 다양한

많은 미생물과 박테리오파지(bacteriophage)를 30년 이상 보존할 수 있습니다.

- 용기가 작아 보관이 용이하며, 건조된 미생물이 산소·습기·빛에 노출되지 않으면 장기간

보존할 수 있고, 필요한 경우 본래의 상태로 되돌릴 수 있다는 게 장점입니다. 동결 시

동결보존제는 동결 건조 전후 균의 완충 및 보호에 있어서 매우 중요합니다.


초저온 냉동 보존법(ultra-freezing)

- 장기 보존을 위해서는 동결한 후 -50~-80℃ 범위에서 보존되어야 합니다. 초저온 냉동기

(-80℃), 액체질소(-196℃), 액체질소증기(-150℃)에서 얼린 상태로 보존할 수 있습니다.

- 15년간 보존도 가능하다 보고되었습니다. 하지만 초저온 냉동고는 고장이나 정전에 주의해

야 하고 액체질소의 경우 유지비가 많이 드는 단점이 있습니다. 일반적인 보존 기간은 -60℃

에서 5년간으로 보고되었습니다.

- 동결보존제로는 글리세롤(glycerol)과 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)를

주로 사용하고 있으며, 세포막을 쉽게 통과하여 세포 내·외부가 빙점 이하로 떨어지는 것을

방지하는 기능을 합니다. 설탕, 유당, 포도당, 만니톨, 솔비톨, 덱스트란, 폴리글리콜 등의

동결보존제는 세포막 외부에서 동결을 방지합니다. 글리세롤은 10%, DMSO는 5%가 최적

농도이며, 글리세롤은 고압 살균으로, DMSO는 막 여과기로 각각 멸균하며 4℃에서 보존합

니다.


출처 - 세계김치연구소 2019 Kimchi FAQ

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